GLIKOPEGILINTO REKOMBINATINIO ŽMOGAUS VIIa FAKTORIAUS BIOFIZIKINIS APIBŪDINIMAS

Ištrauka

GLIKOPEGILINTO REKOMBINATINIO ŽMOGAUS VIIa FAKTORIAUS BIOFIZIKINIS APIBŪDINIMAS

Turinys
1.ĮVADAS 3
2.METODAI 4
2.1.Poliakrilamido gel elektroforezė (SDS-PAGE) 4
2.2.Masės spektroskopijos analizė (MALDI-TOF MS) 4
2.3.Cirkuliacinė dichroizmo spektroskopija (Circular dichroism spectroscopy (CD)) 4
2.4.Diferencinė skenuojamoji kalorimetrija (Differential scanning calorimetry (DSC)) 4
2.5.Šviesos sklaida (Light scattering (LS)) 5
3.REZULTATAI 6
3.1.Grynumas 6
3.2.Struktūrinis stabilumas 7
3.3.Šilumos, kinetinis ir struktūrinis stabilumas 7
4.APTARIMAS IR APIBENDRINIMAS 8
5.IŠVADOS 10
6.NAUDOTA LITERATŪRA 11

1.ĮVADAS
Problemos:
1.Glikopegilinimas neleidžia arba atideda rVIIa faktoriaus agregaciją.
2.Pegiliuotų baltymų naudingumą atspindi paties PEG polimero savybės.
3.Palankios ypatybės kaip atidėtas arba sustabdytas agregavimas ir terminis stabilizavimas, kurias sukelia
labai hidratuotas PEG polimeras, PEG polimerų savybės yra perduodamos pegilintiems junginiams.
Tikslas:
Išsiaiškinti kaip glikopegilinimo metu gali pasikeisti rekombinantinio žmogaus VIIa faktoriaus struktūra,
šiluminis ir kinetinis stabilumas.
Uždaviniai:
1.Ištirti galimus pokyčius antrinei ir tretinei struktūrai rVIIa faktoriaus glikopegilinimo metu.
2.Nustatyti šilumos ir kinetinio stabilumo pasekmes rVIIa faktoriaus glikopegilinimo metu.

2.METODAI
2.1.Poliakrilamido gel elektroforezė (SDS-PAGE)
Poliakrilamido gel elektorforezės analizė buvo atliekama naudojant 12% Bis-Tris gelį iš lnvitrogen. Gelis
plaunamas 150ml 0,1 M perchlorato rūgšties 15 min iki 40ml 5% bario chlorido tirpalo ir 15 ml 0.1M jodo
tirpalas buvo pridėtas aptikti baltymų juostas, kurių sudėtyje yra PEG junginiai. Po spalvos pasikeitimo,
gelis buvo nudažytas su Coomassie mėlynu reagentu.