Molekulinis klonavimas, ekspresija, gryninimas ir charakterizacija sutrumpintų žmogaus plazminogeno formų panaudojant Pichia pastoris mielių ekspresijos sistemą

Ištrauka

Molekulinis klonavimas, ekspresija, gryninimas ir charakterizacija sutrumpintų žmogaus plazminogeno formų panaudojant Pichia pastoris mielių ekspresijos sistemą
Projektas

Įvadas
Problema: Atliekant proteolitinį iš žmogaus kraujo išskirto plazminogeno skaldymą in vitro yra
gaunami labai maži kiekiai sutrumpintų plazminogeno formų, todėl šiame tyrime bandoma optimizuoti
metodiką skirtą ekspresuoti sutrumpintas plazminogeno formas dideliais kiekiais P. pastoris mielių ląstelėse.
Tikslas: Panaudojant Picha pastoris mielių ekspresijos sistemą klonuoti, ekspresuoti, gryninti ir
apibūdinti sutrumpintas žmogaus plazminogeno formas.
Kishore K. Joshi, Girish Sahni, Molecular cloning, expression, purification and characterization of truncated forms of human plasminogen ir Pichia pastoris expression system;
Process Biochemistry, 2010

Literatūros apžvalga
Žmogaus plazminogenas – tai didelis glikoproteinas, kuris yra sudarytas iš 791 amino rūgšties,
šis baltymas turi 24 disulfidinius tiltelius. Plazminogenas yra serino proteazės pro-fermento forma,
žmogaus organizme jis randamas kraujyje ir daugelyje ektraląstelinių skysčių. Plazminogenas yra labai
svarbus fibrinolizinei kaskadai, nes ji prasideda tik tada, kai yra aktyuojamas plazminogenas.
Organizme plazminogenas yra verčiamas plazminu, o šis hidrolizuoja fibriną ir ištirpdo kraujo krešulį.
Tai paplitusi trombolitinė terapija esant kraujo krešėjimo sutrikimams, tokiems kaip ūminis miokardo
infarktas ar insultas. Plazminas taip pat vaidina svarbų vaidmenį kitų kaskadų aktyvavimui,
pavyzdžiui, metaloproteinazės aktyvavimui, jis svarbus žaizdų gijimui, audinių atsinaujinimui,
angiogenezei, embriogenezei.