REKOMBINANTINIO ŽMOGAUS IL – 2 GAMYBA NAUDOJANT TRANSGENINIUS AUGALUS

Ištrauka

REKOMBINANTINIO ŽMOGAUS IL – 2 GAMYBA NAUDOJANT TRANSGENINIUS AUGALUS
Projektas

TURINYS
1.ĮVADAS 3
2.TRANSGENINIŲ AUGALŲ PASIRINKIMAS 4
3.EKSPRESIJOS VEKTORIŲ PASIRINKIMAS 4
4.TRANSFORMACIJOS 5
4.1. Stabilios genetinės transformacijos ir augalų regeneracija 5
5.TRANSGENINIŲ AUGALŲ VERTINIMAS 6
5.1. Fluorescencinė židininė mikroskopija 6
5.2.Tirpūs baltymų ekstraktai/ kiekybė (vakarų krypties blotingui) 6
5.3.Vakarų krypties blotingo užrašymas 6
5.4.Augalų palikuonių paveldimumas 6
6.AUGALŲ DERIVATŲ rhIL-2 VERTINIMAS 6
6.1.Mėginio paruošimas T-ląstelių proliferacijos tyrimui 6
6.2.Augalų pagamintų rhIL-2 kiekybinis nustatymas 7
6.3.T-ląstelių proliferacijos tyrimas 7
7.REZULTATAI 7
7.1.Mikroskopija laikinai transformuotų augalų audinių 7
7.2. Vakarų krypties blotingas nustatant stabiliai transformuotus augalus 8
7.3. Ląstelių proliferacijos analizė 8
8.APIBENDRINIMAS 8
9.IŠVADOS 9

1.ĮVADAS
Inerleukinas – 2 yra citokinas, kuris reguliuoja daug imunologinių procesų ir yra kliniškai
reikšmingas. Genų ekspresijos būdu gaminant rekombinantinį žmogaus interleukiną – 2 (rhIL-2)
dažniausiai yra naudojamos E.coli ekspresijos sistemos. RhIL – 2 yra vartojamas esant metastazavusiai
melanomai ir inkstų ląstelių vėžiui. Šiame darbe, remiantis pasirinktu straipsniu, apžvelgsiu kitą
perspektyvią ekspresijos sistemą – transgeninius augalus, šiuose tyrimuose buvo pasirinktas tabakas
(Nicotiana benthamiana). Kita ekspresijos sistema buvo pasirinkta siekiant sumažinti produkto kainą ir
padaryti jį labiau prieinamą labiausiai vargstantiems pasaulio gyventojams.
Problema: E.coli ekspresijos sistemos yra neekonomiškos gaminant rekombinantinį žmogaus interleukiną – 2.
Tikslas: ištirti transgeninių augalų ekspresijos sistemą, kaip alternatyvą gaminant rekombinantinį žmogaus interleukiną – 2.
Uždaviniai:
1.Išsiaiškinti ar transgeniniai augalai yra tinkama ekspresijos sistema gaminant rhIL-2
2.Palyginti transgeninių augalų ir E.coli ekspresijos sistemas
3.Ištirti ar transgeniniai augalai yra biologiškai aktyvūs