BIOFARMACINIO PRODUKTO KOKYBINĖ ANALIZĖ

Ištrauka

BIOFARMACINIO PRODUKTO KOKYBINĖ ANALIZĖ
Referatas

Turinys
Įvadas 4
Baltyminių produktų priemaišų aptikimas 4
Natrio dodecilsulfato denatūruojanti poliakrilamidinio gelio elektroforezė
(SDS-PAGE) 4
Kapiliarinė elektroforezė 5
Didelio efektyvumo skysčių chromatografija (HPLC) 5
Aminorūgščių analizė 6
Peptidų žemėlapis 7
N galo sekvenavimas 7
Antrinės ir tretinės struktūros analizė 7
Biologiniai kontaminantai ir jų detekcijos metodai 8
Endotoksinai ir kiti pirogeniniai kontaminatai 8
Pirogenų aptikimas 8
DNR 10
Mikroorganizmų ir virusiniai kontaminantai 11
Virusų nustatymo metodai 12
Neląsteliniai kontaminantai 13
Išvados 14
Naudota literatūra 15
Turinys 2
Įvadas 4
Baltyminių produktų priemaišų aptikimas 4
Natrio dodecilsulfato denatūruojanti poliakrilamidinio gelio elektroforezė
(SDS-PAGE) 4
Kapiliarinė elektroforezė 5
Didelio efektyvumo skysčių chromatografija (HPLC) 5
Aminorūgščių analizė 6
Peptidų žemėlapis 7
N galo sekvenavimas 7
Antrinės ir tretinės struktūros analizė 7
Biologiniai kontaminantai ir jų detekcijos metodai 8
Endotoksinai ir kiti pirogeniniai kontaminatai 8
Pirogenų aptikimas 8
DNR 10
Mikroorganizmų ir virusiniai kontaminantai 11
Virusų nustatymo metodai 12
Neląsteliniai kontaminantai 13
Išvados 14
Naudota literatūra 15

Įvadas
Biofarmaciniais preparatais vadinami vaistai, gaminami biotechnologiniais metodais. Tai tokie baltymai,
antikūnai, nukleino rūgštys, naudojamos gydymui bei diagnostikai. Jos išskiriamos iš mikroorganizmų arba
žinduolių ląstelių. Pirmasis tokiu būdu gautas biofarmacinis preparatas buvo insulinas, išskirtas 1982 metais.
Šiuo metu taip gaminami įvairūs fermentai, hormonai, interferonai, kitos biologiškai aktyvios medžiagos.
Biofarmaciniais preparatais gydomas diabetas, kai kurios vėžio rūšys, hemofilija, artritas, išsėtinė sklerozė,
hepatitai. Visiems farmacijos galutiniams produktams turi būti atlikti griežti kokybės kontrolės tyrimai,
užtikrinantys jų saugumą. Rekombinantiniams biofarmacijos preparatams taikoma kur kas daugiau ir
sudėtingesnių analizės būdų, lyginant su tradiciniais preparatais, pagamintais organinės sintezės būdu.
Biofarmacijos įmonės ypatingą dėmesį skiria kokybės užtikrinimui ir agregatų, galinčių padidinti imuninį
atsaką, sukelti nepageidaujamų pasekmių, pavojų žmogaus saugumui ir vaistų veiksmingumui.
Baltyminių produktų priemaišų aptikimas
Natrio dodecilsulfato denatūruojanti poliakrilamidinio gelio elektroforezė (SDS-PAGE)
Dažniausiai naudojamas analitinis metodas galutinio produkto grynumo vertinimui.
Tai populiarus metodas, taikomas norint atskirti baltymus, remiantis jų santykine molekuline mase
(pvz. atskiri polipeptidai, prisijungę per disulfido ryšius, bus atskirti, remiantis jų santykine
molekuline mase). Atskiriami kontaminantai gali būti nesusiję su produktu, arba gali būti to
produkto variantai (pvz. skirtingai glikozilinti variantai, Proteolitiniai fragmentai ir t.t). Juostos,
sudėtyje turinčios mažai, kaip, pvz. 100 ng baltymų, gali būti vizualizuojamos dažant gelį su dažais,
pvz. Coomassie mėlyna. Densitometrija leidžia kiekybiškai nustatyti baltymų kiekį kiekvienoje juostoje.
Dažymas sidabro pagrindu pasižymi labai dideliu jautrumu, kuris gali būti padidintas
net iki 100 kartų, nes geba aptikti mažiau nei 1 ng baltymų. Tačiau, šis procesas apima kelis
veiksmus ir reagentus, todėl jį atlikti gana sudėtinga ir užtrunka nemažai laiko. Be to atkuriamumas
yra mažas. Kadangi sidabras jungiasi prie baltymo ne stechiometriškai, kiekybiniai tyrimai,
naudojant densitometrija negali būti atliekami.
SDS-PAGE metodo trūkumas, susijęs su grynumo analize, yra tai, jog priemaišos,
kurių molekulinė masė yra tokia pati kaip produkto, liks nepastebėtos, nes jos migruos kartu.
Naudojant 2-dimensijų (2-D) elektroforezės analizę galima to išvengti, kadangi baltymų atskyrimas
paremtas skirtingomis molekulinėmis savybėmis. Dažniausiai baltymų frakcijonavimui
panaudojamas 2D elektroforezė, kai pirmoje kryptyje baltymų kompleksai frakcijonuojami pagal jų
izoelektrinį tašką, o antroje pagal jų molekulinį svorį. Šis metodas lengvai prieinamas, todėl
taikomas biofarmacijos galutinių produktų grynumo analizei. Šis metodas taip pat naudojamas
biofarmacijos...