Alkoholdehidrogenazės pradinio fermentinės reakcijos

Ištrauka

LABORATORINIS DARBAS Nr. 2 Alkoholdehidrogenazės pradinio fermentinės reakcijos greičio ir aktyvumo nustatymas

Darbo tikslas Nustatyti alkoholdehidrogenazės (ADH) pradinį reakcijos greitį ir aktyvumą. Tyrimo objektas Mielių ADH. Matavimo priemonės Automatinės 200 μL, 1000 μL, 5000 μL pipetės, spektrofotometras SF26 su kiuvete, kurioje palaikoma pastovi temperatūra, svarstyklės.

Darbo eiga Darbo esmė. Fermentas ADH priklauso oksidoreduktazių klasei ir katalizuoja reakciją: ADH C2H5OH + NAD + ↔ CH3CHO + NADH + H + Vykstant oksidacijos-redukcijos procesams, kuriuos katalizuoja nikotininių kofermentų turinčios dehidrogenazės, kinta kofermentų absorbcijos maksimumai. NAD + ir NADH absorbuoja šviesą, esant bangos ilgiui 260 nm. Tačiau esant bangos ilgiui 340 nm, absorbuoja tik NADH, o NAD + absorbcija iš esmės nevyksta. Todėl vienos kofermento formos perėjimą į kitą labai patogu sekti registruojant spektrofotometru optinio tankio kitimą, esant bangos ilgiui 340 nm.